Molecular mechanisms of the translocation of Yersinia Yop proteins across the eukaryotic cell membrane
(1999)
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- Cornélis, Guy R.
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- Le virulon Yop de Yersinia constitue le paradigme des systèmes de sécrétion-translocation de type III. Ce système de virulence consiste en l’injection de protéines bactériennes, appelées effecteurs, dans le cytosol des cellules de l’hôte en vue d’y modifier l’organisation au profit de la bactérie. L’injection de ces effecteurs comprend plusieurs étapes dont le passage au travers des membranes bactériennes, étape appelée sécrétion, et le passage au travers de la membrane de la cellule eucaryote, étape appelé translocation. Le but de cette thèse est de clarifier le mécanisme de la translocation des effecteurs injectés par Yersinia. <BR> Les protéines impliquées dans le processus de translocation sont codées par l’opéron IcrGlcrVsycDyopByopD. Leur rôle et leur organisation étaient inconnus au début de ce projet. L’existence d’un complexe dans le cytoplasme bactérien, constitué de YopB et de YopD, associés à leur chaperon SycD, a pu être démontrée par co-purification de protéines de fusion avec la glutathione-S-transférase (GST) et par co-immunoprécipitation du complexe. Dans un mutant IcrV non polaire, ce complexe n’est plus sécrété, ce qui suggère une interaction entre YopB, YopD et LcrV. En accord avec cette idée, la liaison entre LcrV et YopB, d’une part et entre LcrV et UopD d’autre part, a également pu être mise en évidence, à l’aide de protéines de fusion avec la GST. Nous proposons que, au moment de la sécrétion, SycD est relargué dans le cytoplasme bactérien et LcrV vient se lier au complexer YopB-YopD, promouvant ainsi sa sécrétion et son assemblage pour former l’appareil de translocation. <BR> Yersinia présente une activité hémolytique qui dépend de la protéine YopB suggérant que celle-ci est impliquée dans l’insertion d’un pore (Hakansson et al., 1996b). Vu que nos résultats montrent que YopB et YopD forment un complexe dans la bactérie, il était envisageable que YobD soit également impliqué dans la formation du pore. L’insertion de pores dans la membrane de macrohages a pu être démontrée par l’usage de marqueurs flourescents de différentes tailles et par l’observation de l’écrasement de cellules infectées par Yersinia. L’importance de YopB et YopD dna la formation des pores a pu être mise en évidence dans ce système en infectant les macrophages par des Yersinia mutées dans les gènes correspondants. Par contre une mutation dans LcrG n’affecte pas l’insertion du pore. Ces résultats ont été confirmés par des expériences d’hémolyse. <BV> La question de la formation du pore a également été étudiée par des techniques d’électrophysiologie en collaboration avec V. Cabiaux et F. Tardy (ULB). L’analyse de la conductance au travers de bicouches lipidiques artificielles infectées par Yersinia sauvage ou par des bactéries mutées a permis de mettre en évidence l’insertion d’un canal par les bactéries dans la membrane de liposomes. Ce phénomène requiert également YopB et YopD mais ne requiert pas LcrG. <BR> En annexe de ce travail, l’identification de gènes de résistance à l’arsenic sur un transposon, porté par le plasmide de virulence de Yersinia enterocolitica est présentée
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Citations
Neyt, C. (1999). Molecular mechanisms of the translocation of Yersinia Yop proteins across the eukaryotic cell membrane. https://hdl.handle.net/2078.5/111052