Clonage et caractérisation de gènes induits par l'interleukine 9
(1995)
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- L’interleukine 9 (IL-9) est une molécule produite par des lymphocytes T activés. Elle a été identifiée chez la souris comme facteur permettant la croissance permanente de clones de lymphocytes T auxiliaires en absence d’antigène et de cellules présentatrices. Contrairement aux autres facteurs de croissance des lymphocytes T comme l’IL-2 et l’IL-4, l’IL-9 semble dénuée de toute activité vis-à-vis des lymphocytes T normaux fraîchement isolés quel que soit le costimulus utilisé. <BR> Le but de ce travail était de caractériser la mode d’action de l’IL-9 sur les lymphocytes T en comparant la capacité de différents facteurs de croissance d’induire une réponse proliférative d’une même cellule. <BR> L’étape initiale a consisté à obtenir de nouvelles lignées de lymphocytes T auxiliaires dont la prolifération est dépendante de l’IL-9. Le procédé utilisé a été de maintenir en culture un clone T auxiliaire en présence de son antigène et de splénocytes irradiés en guise de cellules présentatrices. Après chaque période de stimulation antigénique, la réponse proliférative induite par k’IL-9 a été analysée. Nous avons montré que cette réponse est une propriété qui s’acquiert graduellement au cours de la culture in vitro d’un clone de lymphocytes T et que plusieurs stades successifs peuvent être distingués : augmentation de la survie des lymphocytes T, prolifération induite par l’IL-9 en synergie avec l’IL-3 ou l’IL-4 et enfin, croissance en réponse pà l’IL-9 seule. A ce stade, il est possible de cultiver les clones T sans antigène et en absence de cellules présentatrices dans du milieu contenant uniquement de l’IL-9. En appliquant cette technique nous avons pu obtenir 9 lignées T dépendantes de l’IL-9 pour leur croissance à partir de 7 clones différents. <BR> La transition du clone T dépendant de l’antigène et de cellules présentatrices à la lignée continue s’accompagne d’une perte progressive de marqueurs de différenciation et correspond à un stage pré-transformé. En effet, nous avons observé que le stade de lignée dépendante de l’IL-9 est régulièrement suivi par l’apparition de variants à croissance autonome qui produisent des tumeurs chez l’animal syngénique. Ces résultats suggèrent un rôle potentiel de l’IL-9 dans certains processus de tumorigenèse. Cette hypothèse a été âr ailleurs confortée par l’observation que cette cytokine est un facteur de croissance particulièrement actif pur les lymphomes thymiques in vitro, et que, in vivo, des souris transgéniques qui expriment de grandes quantités d’IL-9 montrent une susceptibilité anormalement élevée au développement de lymphomes thymiques. <BR> Parmi les cellules dépendantes de l’IL-9 obtenues, quatre lignées (TS2, TS3 et TS6) se sont avérées capables de proliférer non seulement en réponse à l’IL-9 mais également en réponse à l’IL-2 ou l4IL-4. Nous avons étudié la sensibilité de ces cellules maintenues dans les différents facteurs de croissance, à diverses substances connues pour affecter le métabolisme cellulaire. <BR> Une différence frappante a été observée avec la dexaméthasone. En effet, bien que l’IL-2, l’IL-4 et l’IL-9 protègent contre l’apoptose induite par la dexaméthasone, seules l’IL-9 et l’IL-4 permettent la prolifération de ces cellules en présence de corticoïde. Par ailleurs, nous avons montré que l’inhibition de prolifération peut être levée par l’addition d’IL-9 ou d’IL-4, ce qui indique qu’en présence d’IL-2, la dexaméthasone affecte la prolifération des cellules mais pas leur viabilité. <BR> L’activité de l’IL-9 et de l’IL-4 dans ce système est inhibée par un anticorps dirigé contre la chaîne γc quoi est une composante comme aux récepteurs de l’IL-2, l’IL-4 et de l’IL-9. Cette observation indique qui γc est un élément impliqué dans la voie d’activation induite par l’IL-4 et l’IL-9 dans ce modèle. <BR> Enfin, l’obtention de lignées qui prolifèrent en réponse à plusieurs facteurs de croissance, ont permis l’identification de gènes sélectivement activés en réponse à l’IL-9. Ceci a pu être réalisé par hybridation différentielle d’une bibliothèque d’ADNc de la lignée TS2 cultivée en présence d’IL-9, en utilisant des ADNc radioactifs de la même cellule stimulée par l’IL-2 ou l’IL-9. Cette approche a permis d’identifier quatre gènes dont l’expression est induite par l’IL-9. Trois de ces gènes correspondent à des séquences connues : la chaîne alpha du récepteur IgE de haute affinité, le Granzyme A et le Granzyme B. La quatrième gène code une nouvelle protéine intervenant dans la polymérisation de l’actine, la GLP (Gelsoline Like Protein). L’analyse de l’expression de ces gènes dans diverses lignées qui expriment le récepteur de l’IL-9 a révélé qu’à l’exception du Granzyme A, ces gènes sont également induits dans les mastocytes. De plus, nous avons montré que l’IL-9 induit l’expression de protéases spécifiques des mastocytes dans les lignées de lymphocytes T auxiliaires dépendantes de l’IL-9. Le fait que cette cytokine induit l’expression dans les lymphocytes de marqueurs considérés comme spécifiques des mastocytes suggère que l’IL-9 confère aux clones T étudiés dans ce travail un phénotype apparenté aux mastocytes
- Affiliations
UCLouvain MD/MIGE/MEXP - Unité de médecine expérimentale
Citations
Louahed, J. (1995). Clonage et caractérisation de gènes induits par l’interleukine 9. https://hdl.handle.net/2078.5/111456