Développement d’un modèle murin humanisé pour le gène CFTR
(2020) Colloque français des jeunes chercheurs sur la mucoviscidose — Location: Paris, France
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- Authors
Mottais, Angélique 
- et. al.
- Abstract
- Objectifs Les modèles animaux sont largement utilisés pour l’étude de la physiopathologie des maladies humaines et de l’efficacité des nouvelles thérapeutiques. Dans le cadre de la mucoviscidose, plusieurs modèles animaux (souris, cochons, furets, etc…) ont été développés. Cependant, ils ne reproduisent pas fidèlement le phénotype respiratoire sévère typiquement associé à la haute morbidité et mortalité de la maladie humaine. Sur la base de l’observation que la mutation F508del du gène CFTR conduit à un phénotype respiratoire de mucoviscidose plus sévère pour le CFTR humain (hCFTR) que pour le cftr murin (mcftr), l’objectif de ce projet est de générer un modèle murin humanisé pour le gène CFTR. Matériels et Méthodes Une lignée de souris KO-cftr a été générée en utilisant le système d’édition du génome CRISPR/Cas9. Dans ce but, un ARN guide ciblant l’exon 1 a été employé pour engendrer des mutations dans le gène mcftr. En parallèle, une lignée de souris sur-exprimant le hCFTR sauvage (« wild-type », WT) ou mutée (mutation F508del) a été générée par transgénèse d’addition. Pour ce faire, une construction plasmidique (pcDNA3.1-hCFTR, promoteur CMV) a été conçue, amplifiée, purifiée, puis micro-injectée dans des embryons de souris C57BL/6NCrl. Résultats Concernant le développement de la lignée « knock-out » pour le gène mcftr, 33 souris ont été générées. Après comparaison des séquences de l’exon 1 des souris WT avec celles des souris générées, 7 souris présentaient au moins une mutation dans le gène d’intérêt. Les hétérozygotes générées n’ont pas montré d’atteintes spécifiques (taille normale, âge de survie normale). Concernant le modèle de souris humanisées, les constructions du pcDNA3.1-hCFTR (CFTR-WT ou CFTR-F508del) ont été injectées respectivement dans 178 et 115 embryons de souris C57BL/6NCrl. Vingt-sept nouveau-nés pour le groupe hCFTR-WT et 14 pour le groupe hCFTR-F508del ont été obtenus. Parmi ceux-ci, 5 souris transgéniques (2 souris WT-hCFTR et 3 souris F508del-hCFTR) ont été obtenues. Discussion et Conclusion Après fixation des différentes mutations sur plusieurs générations, les deux lignées seront croisées en vue d’obtenir une lignée sur-exprimant uniquement le gène CFTR humain. De plus, des souris de la lignée KO-cftr seront croisées entre elles afin d’obtenir des souris à l’état homozygote. L’étude phénotypique des différents organes cibles de ces modèles permettra de mieux comprendre les différences de corrélation génotype-phénotype entre les CFTR humain et murin.
- Affiliations
Citations
Mottais, A., & et al. (2020). Développement d’un modèle murin humanisé pour le gène CFTR. Colloque français des jeunes chercheurs sur la mucoviscidose, Paris, France. https://hdl.handle.net/2078.5/28466