La différenciation cellulaire des macrophages dans la mucoviscidose est tournée vers un profil pro-inflammatoire
(2014) 15ème Colloque des Jeunes Chercheurs — Location: Paris (18.July.2014)
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- Objectif Depuis quelques années, il est suggéré que les macrophages pourraient contribuer à l’hyperinflammation caractéristique de la mucoviscidose. Des travaux préalables de notre groupe ont démontré que, même en absence de toute stimulation, les macrophages alvéolaires et péritonéaux sont plus abondants chez la souris CFTRtm1Eur, homozygote pour la mutation F508del-CFTR, que chez la souris sauvage (WT). L’objectif de ce travail est d’évaluer l’équilibre de la différenciation pro/anti-inflammatoire des macrophages CF et l’influence de la protéine CFTR sur cet équilibre. Méthodes Des cultures primaires de macrophages pulmonaires et péritonéaux des souris CFTRtm1Eur et sauvages ont été établies après séparation et purification à partir de lavages bronchoalvéolaires et d’homogénats de poumons d’une part, de lavages péritonéaux d’autre part. La différenciation en macrophages M1 pro-inflammatoires a été induite par l’exposition combinée au LPS et à l’IFNγ, et la différenciation M2 anti-inflammatoire, par l’association d’IL-4 et d’IL-13. L’expression des médiateurs pro-inflammatoires (NOS-2, TNF-alpha et IL-1beta) et anti-inflammatoires (Arg-1, FIZZ-1 et mYm1) a été évaluée par RT-PCR quantitative dans les macrophages et par ELISA dans les surnageants de culture. En outre, l’expression de CFTR dans les macrophages étant très controversée, nous avons quantifié le transcrit par RT-PCR quantitative et détecté la protéine par western-blot et immunofluorescence dans des macrophages provenant de souris CFTRtm1Eur et sauvage. Des macrophages provenant de souris invalidées pour le gène CFTR (CFTRtm1Unc) ont été testés comme contrôle négatif. Résultats Les macrophages pulmonaires et péritonéaux provenant de souris WT et F508del-CFTR expriment du CFTR, bien qu’en quantités faibles, tant au niveau de l’ARNm que de la protéine. L’expression est absente dans les cellules provenant des souris invalidées pour le gène CFTR. La polarisation M1/M2 est altérée dans les macrophages F508del-CFTR. En effet, tant pour les macrophages pulmonaires que pour les péritonéaux, la production de cytokines pro-inflammatoires en réponse à l’activation de la voie M1 est au moins 4 fois plus grande dans les cellules CF que dans les WT. Par contre, la production de médiateurs anti-inflammatoires en réponse à la stimulation M2 est plutôt réduite dans les cellules CF. Ces résultats indiquent un déséquilibre de la différenciation cellulaire et de la réponse pro/anti-inflammatoire dans les macrophages en cas de mucoviscidose. Discussion & Conclusions Dans les souris CF, la différentiation cellulaire des macrophages provenant de différents compartiments de l’organisme est tournée vers un profil pro-inflammatoire associée à une réponse anti-inflammatoire plutôt réduite. Ces résultats indiquent que les macrophages jouent un rôle critique dans la réponse inflammatoire dans la mucoviscidose et que l’activité de ces cellules dépend de l’intégrité structurelle et/ou fonctionnelle de la protéine CFTR.
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Citations
Noël, S., Dhooghe, B., Panin, N., Beka, M., & Leal, T. (2014). La différenciation cellulaire des macrophages dans la mucoviscidose est tournée vers un profil pro-inflammatoire. 15ème Colloque des Jeunes Chercheurs, Paris. https://hdl.handle.net/2078.5/65616