Mise en évidence d'une interaction entre le précurseur du peptide amyloïde de la maladie d'Alzheimer et la protéine tau par caractérisation d'anticorps monoclonaux
(1998)
Files
247526_Philippe_These.pdf
Restricted Access - Adobe PDF
- 10.01 MB
Details
- Authors
- Supervisors
- Abstract
- La maladie d’Alzheimer est une démence dégénérative caractérisée par deux types de lésions. Les plaques séniles et les dégénérescences neurofibrillaires intraneuronales. Les dégénérescences neurofibrillaires sont composées de paires hélicoïdales de filaments ou PHF, leur constituant majeur est la protéine tau associées aux microtubules (MAPtau). Les plaques séniles sont formées d’un noyau de substance amyloïde dont le constituant majeur est un peptide de 39 à 43 acides aminés appelé peptide Aβ. Ce peptide est issu d’un précurseur transmembranaire : le précurseur du peptide amyloïde (APP). Actuellement, huit isoformes transmembranaires de cette protéine ont été identifiées, les plus courantes sont l’APP 695, 751 et 770. <BR> Grâce au développement des modèles cellulaires et à la production d’anticorps dirigés contre le précurseur du peptide amyloïde, le métabolisme cellulaire de l’APP a pu être étudié. Au sein de notre laboratoire, de tels anticorps ont été produits après inoculation chez la souris d’une protéine de fusion entre la β-galactosidase et l’extrémité N-terminal de l’APP 770 humain. Parmi les clones isolés, le 3H5 a été étudié par une approche biochimique et immunohistochimique. Cet anticorps reconnaît l’APP recombinant, l’APP cérébral humain et les différentes isoformes de l’APP sécrétées dans le milieu de culture des cellules transfectées. Cet anticorps monoclonal marque également les neurites dystrophiques entourant le noyau amyloïde des plaques séniles présentes au niveau du cortex cérébral des patients atteints de la maladie d’Alzheimer. L’expression bactérienne de différents fragments d’ADNc codant des séquences de l’APP nous a permis de déterminer l’épitope reconnu par cet anticorps. Celui-ci correspond à une séquence de 24 acides aminés localisée dans le domaine anionique extracellulaire de l’APP. <BR> L’anticorps monoclonal 5D12 dérivé du second clone que nous avons isolé. Cet anticorps marque les dégénérescences neurofibrillaires et les paires hélicoïdales de filaments isolés. Le liquide d’ascite produit par le clone 5D12 contient un haut titre d’anticorps dirigé contre les MAPs thermostables. La protéine reconnue dans la fraction thermostable des MAPs est la protéine tau. En immunotransfert, le 5D12 reconnaît la protéine tau isolée de cerveau de rat, de cerveau humain et tau-PHF isole de patients atteints de la maladie d’Alzheimer. Il reconnaît également la protéine tau recombinante mais il ne reconnaît ni la protéine de fusion utilisée comme immunogène, ni la protéine tau recombinant dépourvue de se moitié carboxy-terminale. Cette moitié carboxy-terminale contient les séquences répétitives correspondant au domaine de liaison de la tubuline. Les propriétés particulières de l’anticorps monoclonal 5D12 nous ont amené à émettre l’hypothèse d’une association entre l’extrémité N-terminale de l’APP et l’extrémité C-terminale de la protéine tau. Si cette hypothèse s’avérait exacte, l’anticorps monoclonal 5D12 pourrait correspondre à un anticorps anti-idiotype. Ce qui permettrait d’expliquer pourquoi l’immunisation de souris par le domaine N-terminal de l’APP conduit à la production d’un anticorps dirigé contre la moitié carboxy-terminale de tau. In vitro, nous avons démontré une association entre l’extrémité soluble de l’APP et les MAPs thermostables
- Affiliations
Citations
Philippe, B. (1998). Mise en évidence d’une interaction entre le précurseur du peptide amyloïde de la maladie d’Alzheimer et la protéine tau par caractérisation d’anticorps monoclonaux. https://hdl.handle.net/2078.5/111519