Expression des peroxyrédoxines bovines au cours du développement embryonnaire précoce et régulation de la peroxyrédoxine 6 au sein des complexes ovocyte-cellules de cumulus
(2004)
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- Les peroxyrédoxines (PRDXs) sont présentes depuis les procaryotes jusqu'aux mammifères où la famille compte six membres : PRDX1 à PRDX6. Ces peroxydases sont impliquées dans la défense antioxydante et la modulation de la transduction des signaux intracellulaires. Sachant que les ovocytes et les embryons produisent des espèces activées de l'oxygène, et que les embryons sont particulièrement sensibles au stress oxydant, il était particulièrement intéressant d'étudier cette famille d'enzymes dans ces entités. Travaillant avec l'espèce bovine, nous avons au préalable cloné les 4 membres de la famille pour lesquels les séquences n'étaient pas publiées dans les banques de données : PRDX1, PRDX2, PRDX4 et PRDX5. L'étude des séquences peptidiques déduites des séquences nucléotidiques montre une importante conservation des PRDXs bovines, avec un minimum de 95 % de similitudes entre les séquences matures bovines et celles d'autres mammifères. Seule la PRDX2 bovine présente une particularité propre, en l'occurrence l'insertion d'un motif Cys-Val-Cys qui pourrait avoir un rôle fonctionnel au sein de l'homodimère. L'étude de l'expression des six PRDXs a ensuite été réalisée par RT-PCR au sein d'une large variété de tissus adultes bovins, mais aussi d'ovocytes et d'embryons produits in vitro. Les transcrits codant les différentes PRDXs ont tous été détectés au sein des 22 tissus analysés, avec cependant des profils d'expression distincts. De même, ces transcrits ont été systématiquement détectés dans l'ovocyte et le blastocyste. Des variations entre les PRDXs ont été observées aux stades précédant ou suivant l'activation majeure du génome embryonnaire (stades 5-8 cellules, 9-16 cellules et morula). Un stress oxydant induit par l'exposition des embryons à 20 % d'oxygène n'a cependant pas permis d'observer de modifications majeures d'expression à ces stades. L'étude par RT-PCR de l'expression des PRDXs dans les ovocytes au cours de la maturation a révélé l'augmentation de l'expression de PRDX6. Cette augmentation a également été observée dans les cellules de cumulus, et une analyse de la protéine par Western blot a confirmé ce phénomène à la fois dans les ovocytes et les cellules de cumulus. Nous avons consacré le reste de notre travail à l'étude de la régulation de l'expression des transcrits codant PRDX6 dans les complexes ovocyte-cellules de cumulus. En maturant les cellules de cumulus sous forme d'amas de cellules sans ovocytes, ou d'amas en présence d'ovocytes dénudés, ou encore sous forme de complexes ovocyte-cellules de cumulus, nous avons montré que l'augmentation d'expression de PRDX6 dans l'ovocyte nécessite l'intégrité des jonctions avec le cumulus, alors que l'augmentation dans les cellules de cumulus a lieu suite à la sécrétion de facteur(s) paracrine(s) par l'ovocyte. L'utilisation de milieux conditionnés avec de la GDF-9 recombinante de souris a permis de montrer que ce facteur paracrine normalement produit par l'ovocyte était capable d'induire l'augmentation de PRDX6 dans les cellules de cumulus. Il est donc probable que GDF-9, qui intervient dans la régulation de l'expression d'une série de protéines importantes pour la maturation des complexes ovocyte-cellules de cumulus, soit aussi le facteur ovocytaire responsable de la régulation de l'expression de PRDX6 dans les cellules de cumulus au cours de la maturation.
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Citations
Leyens, G. (2004). Expression des peroxyrédoxines bovines au cours du développement embryonnaire précoce et régulation de la peroxyrédoxine 6 au sein des complexes ovocyte-cellules de cumulus. https://hdl.handle.net/2078.5/97982